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        共抗疫情 | GeneVac離心濃縮助力引物合成和新冠核酸檢測

        2020年以來,新冠疫情肆虐全球,核酸檢測已經成為當下熱門話題。自從新冠病毒的源頭序列經測序獲得以來,大量的核酸檢測試劑盒就被生產用于普通人群的新冠病毒檢測,離心濃縮作為IVD原料合成制備的關鍵技術之一,在業內發揮了越來越重要的作用。

        圖1:華大基因新冠檢測試劑盒


        今天小編要分享的,是GeneVac離心濃縮儀在核酸合成的主要應用,以及它的效率為何如此之高。


        真空離心濃縮
        在核酸合成的主要應用



        1-核酸的提取和濃縮


        從含有水或水與乙醇混合物的樣品中抽提DNA是生化實驗室最常見的實驗之一。對大多用戶來說,他們需要使用到miVac 設備。從裝于96孔板的DNA樣品中去除幾百微升的溶劑大約只需要10分鐘,甚至更少。

        圖2:用戶正在使用GeneVac miVac-DNA設備


        這是GeneVac真空離心濃縮最簡單的應用之一,在miVac-DNA設備上,設置溫度,選擇醇或水的方法,然后按下啟動鍵即可。



        2-PCR引物和探針的合成

        什么是PCR技術?PCR,即聚合酶鏈式反應的縮寫,一種 DNA(包括 RNA)體外擴增技術,能在短時間內將極微量的特定核酸片段精確復制出成百萬份的拷貝,從而可以實現對極其微量的 DNA 或者 RNA 片段進行定量。在核酸檢測的RT-PCR試劑盒中,需要進行DNA的擴增和標記,因此引物和探針是2個必不可少的物質。


                      常規引物的生產流程
        02

        樣本提取和檢測
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        樣本制備-文庫構建和檢測
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        上機測序
        04

        生物信息學分析


        引物通過自動核酸合成儀合成之后,需要通過不同的分離純化方式(比如脫鹽過柱法或HPLC方法),然后需要使用真空離心濃縮蒸干相關的水或有機溶劑在進行產品的分裝。一般會將產品包裝于EP管或96孔板上。


        圖片

        圖3:常規引物的包裝形式



        3-NGS文庫的制備

        對于二代測序技術,例如外顯子測序和基因捕獲技術,在上機前需要使用測序文庫制備試劑盒來提純和濃縮DNA樣本。


                      NGS測序流程
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        合成引物
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        分離純化
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        樣品濃縮
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        包裝質檢


        由于保存DNA的緩沖液的易揮發性,保持一定的濃度是很困難的。因此,在分析之前,樣品應該立即濃縮和配平到所需的體積,來保證樣品上機前的濃度和質量。


        圖4:華大智造DNBSEQ-T7測序儀




        4-工業級IVD試劑盒原料的制備

        作為分子診斷qPCR試劑盒中的核心原料,qPCR引物及探針的質量對于樣本靶標檢測的準確性,起到了關鍵性作用。而對于分子診斷的應用,引物及探針的純度、熒光強度和潔凈度等一系列指標需要更高的要求。


        對于IVD產品的引物原料,通常需要HPLC級別的純化。經RP-HPLC純化后的樣品溶液通常會是包含水和甲醇或水和乙腈的混合物。實驗人員應遵循核酸樣品HPLC純化后的方法除去有機溶劑。


        GeneVac內置的不平衡容差設計讓用戶有心在梯度不同有機相溶劑中仍可以同時干燥樣品。當然,如果樣品間的不平衡差異太大,儀器系統將自動關閉并告訴用戶。

        圖片

        圖5:國內某核酸合成技術公司購置的

        GeneVac EZ-2 Elite(左)和HT(右)


        GeneVac
        在核酸合成領域的優勢和特點



        高通量

        GeneVac濃縮儀可批量處理樣品:一次可以處理幾百個樣品,加快研發和生產效率。


        miVac,EZ2和HT都有專門適配ep管和96孔板的鋁制實心轉子。HT-12最多一次可以濃縮384個1.5mlEP管或24塊96孔板,大大提高了工作效率。

        圖片

        圖6:EZ2和HT適用的鋁制實心轉子



        樣品保護

        EZ-2和HT全系列皆采用紅外加熱模式,不直接加熱樣品。同時所有型號都配備GeneVac獨有的防爆沸Dri-Pure防爆沸專利,讓用戶處理96孔板等密集型容器時,無需擔心樣品交叉污染。同時所有型號都配備多個溫度探頭,用以在整個離心過程中,檢測樣品和離心腔的溫度變化,確保整個蒸發過程受到質控。


        圖片


        自動停機

        在制備大量的寡核苷酸樣品時,自動停機派上了用處。它可以讓用戶使用默認程序時,自動完成濃縮全過程,無需值守,讓您省心省力。


        圖8:HT配備的樣品溫度探頭


        關于
        英國Genevac

        英國Genevac公司成立于1990年,隸屬SP Scientific旗下,一直專注于研究和生產各種離心蒸發濃縮設備,其產品廣泛應用于生命科學、制藥、化學、分析等領域。主要產品:miVac真空離心濃縮儀、Rocket/EZ-2/HT系列溶劑蒸發工作站。

        真空離心濃縮儀是一種融合了離心、加熱和真空三種技術以有效的蒸發溶劑的方法。離心濃縮處理過后的樣品可方便的用于各種定性和定量分析上——生物化學、生物分析、化學、免疫篩選及儀器分析等。

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